高中牛頓第二定律教案
發(fā)表時間:2021-03-15第二節(jié)DNA片段的擴增——PCR技術(shù)。
第二節(jié)DNA片段的擴增——PCR技術(shù)
[課標要求]
1.理解PCR的原理,討論PCR應(yīng)用。2.嘗試PCR技術(shù)的基本操作。[知識梳理]
一.背景知識
1.細胞內(nèi)DNA復(fù)制步驟:
(1)在作用下解開DNA雙鏈
(2)在作用下,以DNA單鏈為模板,合成一段;(兩條DNA模板鏈各需一個RNA引物)
(3)以RNA引物為起點,在作用下,以為原料,按照堿基互補配對原則合成兩條新鏈。
2.聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)概念;
。
3.PCR過程與細胞內(nèi)DNA復(fù)制過程區(qū)別:
(1)引物是人工合成的單鏈,20-30個脫氧核苷酸,而不是RNA。
(2)解旋通過對反應(yīng)的控制來實現(xiàn)而不依靠。
4.PCR過程:
(1)將PCR緩沖液、、一對引物、四種、DNA聚合酶、Mg2+等成分加入到特制的微量離心管中。
(2)高溫變性:
。
(3)低溫復(fù)性:
。
(4)中溫延伸:
。
二.實踐案例1.PCR實驗雖然原理復(fù)雜,但操作十分簡單,因為生物制劑公司已把PCR緩沖液、DNA聚合酶、脫氧核苷酸貯備液等組分配成了PCR試劑盒,實驗人員僅需加入模板DNA及引物即可,所以快速、高效、靈活和易于操作是PCR技術(shù)的突出優(yōu)點。2.材料用具略3.活動程序(1)加入各種試劑,混合,離心10s,放入PCR儀中。
(2)擴增循環(huán),在PCR儀上設(shè)置好PCR熱循環(huán)程序:
循環(huán)數(shù)
高溫變性
低溫復(fù)性
中溫延伸
第一次
95℃,5min
55℃,1min
72℃,1min
30次
95℃,30s
55℃,30s
72℃,1min
最后一次
——
——
72℃,7min注:反應(yīng)產(chǎn)物在4℃保存4.檢測擴增效果(1)稀釋樣品10倍(2)以H2O作對照,在波長260nm處,將紫外分光光度計讀數(shù)調(diào)到零。(3)加入到厚度為1cm的比色杯中,測定260nm處的光吸收值(4)DNA濃度(μg/mL)=(A260nm/0.02)×稀釋倍數(shù)三.探究活動PCR實驗雖然操作簡單,但實驗設(shè)備及藥品價格較高,可以利用自己準備的簡易材料,設(shè)計并進行PCR技術(shù)的模擬實驗操作。四.PCR技術(shù)意義PCR能,從而有效地解決了因為樣品中DNA含量而難以對樣品進行分析研究的難題,大大提高了對DNA分子的分析和檢測能力,被廣泛應(yīng)用于、基因序列分析、遺傳病診斷,古生物學研究以及形偵破案、親子鑒定等。
五.小知識:
1.DNA的兩條鏈是反向平行的,為了明確地表示DNA的方向,通常將DNA的羥基(-OH)末端稱為5’端。DNA聚合酶不能從頭開始合成DNA,而只能從3’端延伸DNA鏈。但DNA合成的方向是從子鏈的5’端向3’端延伸。
2.引物是一段RNA,它能與DNA母鏈的一段堿基序列互補配對。用于PCR的引物長度通常為20—30個核苷酸。
3.在80C—100C的溫度范圍內(nèi),DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)將解體,雙鏈分開,這個過程稱為變性。當溫度緩慢降低后,兩條彼此分離的DNA鏈又會重新結(jié)合成雙鏈。
[復(fù)習指導(dǎo)]
本節(jié)課復(fù)習要注重細胞內(nèi)DNA復(fù)制過程和體外DNA片段的擴增——PCR技術(shù)的過程,運用DNA復(fù)制過程原理相同的方法,明確體外DNA片段的擴增——PCR技術(shù)在基因克隆、基因序列分析、遺傳病診斷,古生物學研究以及形偵破案、親子鑒定等方面的地位和作用。如何在體外創(chuàng)設(shè)細胞內(nèi)DNA復(fù)制的條件是PCR技術(shù)的關(guān)鍵,細胞內(nèi)的各種條件實際上是利用PCR儀來模擬的。PCR儀原理復(fù)雜,操作簡單。
[典例解析]
1.PCR過程與細胞內(nèi)的DNA復(fù)制過程相比,主要有兩點不同,它們是()
①PCR過程需要的引物是人工合成的DNA單鏈
②PCR過程不需要DNA聚合酶
③PCR過程中DNA的解旋不依靠解旋酶,而是通過對反應(yīng)溫度的控制來實現(xiàn)的
④PCR過程中,DNA不需要解旋,直接以雙鏈DNA為模板進行復(fù)制
A.①②③④B.①②C.①③D.②④
[解析]PCR過程與細胞內(nèi)的DNA復(fù)制過程相比,主要有兩點不同。第一,PCR過程需要的引物不是RNA,而是人工合成的DNA單鏈,其長度通常為20-30個脫氧核苷酸。第二,PCR過程中,DNA解旋不依賴解旋酶,而是通過對反映溫度的控制來實現(xiàn)的。
[答案]C。
2.在PCR擴增前,需要將下列哪些物質(zhì)加入微量離心管中?()
①模板DNA②模板RNA③DNA解旋酶④耐高溫的DNA聚合酶⑤引物⑥PCR緩沖液⑦脫氧核苷酸貯備液⑧核苷酸貯備液
A.①④⑤⑥⑦B.①③④⑤⑥⑧
C.②③④⑤⑥⑦D.①④⑥⑦⑧
[解析]進行PCR過程前,將PCR緩沖液、DNA模板、一對引物、四種脫氧核苷酸、DNA聚合、Mg2+等成分加入到一種特制的微量離心管中。
[答案]A
延伸閱讀
多聚酶鏈式反應(yīng)擴增DNA片段
多聚酶鏈式反應(yīng)擴增DNA片段
教學目標:
(一)知識與技能
1、了解PCR技術(shù)的基本操作
2、理解PCR的原理
3、討論PCR的應(yīng)用
(二)過程與方法
在多聚酶鏈式反應(yīng)擴增DNA片段的實驗過程中,應(yīng)避免外源DNA污染,嚴格控制溫度等反應(yīng)條件
(三)情感、態(tài)度與價值觀
通過對PCR實驗的操作及結(jié)果分析,培養(yǎng)學生嚴謹?shù)目茖W態(tài)度和實事求是的科研精神
教學重點:PCR的原理和PCR的基本操作
教學難點:PCR的原理
教學過程:
(一)引入新課
在現(xiàn)代生物技術(shù)中,DNA技術(shù)可謂是尖端技術(shù)。人類基因組計劃、基因工程、基因診斷、基因檢測、古生物鑒定等都離不開對DNA分子堿基序列的分析。而分析DNA堿基序列,就需要一定量的DNA片段。怎樣迅速獲得足夠量的DNA片段呢?今天我們來研究學習DNA分子的擴增技術(shù)――PCR技術(shù)。
(二)進行新課
1.基礎(chǔ)知識
PCR技術(shù)擴增DNA的過程,與細胞內(nèi)DNA復(fù)制過程類似:
1.1細胞內(nèi)DNA復(fù)制條件分析:
條件組分作用
模板DNA的兩條單鏈提供復(fù)制的模板
原料四種脫氧核苷酸合成DNA子鏈的原料
酶解旋酶
DNA聚合酶打開DNA雙螺旋
催化合成DNA子鏈
能量ATP為解螺旋和合成子鏈供能
引物RNA為DNA聚合酶提供合成的3’端起點
1.2細胞內(nèi)DNA復(fù)制過程
(1)DNA的反向平行結(jié)構(gòu):(結(jié)合投影圖)
核苷酸分子的結(jié)構(gòu)與方向性:(分子結(jié)構(gòu)模式圖)
由核苷酸通過3,5-磷酸二酯鍵連接形成核苷酸長鏈:(模式圖,體現(xiàn)方向性)。
DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的反向平行結(jié)構(gòu):
(2)DNA的復(fù)制過程:
解旋:解旋酶、ATP,DNA兩條鏈打開,,形成兩條DNA單鏈。
引物結(jié)合:在DNA單鏈3’端與DNA反向配對結(jié)合,確保引物3’端與DNA單鏈準確配對。
DNA聚合酶結(jié)合:
子鏈合成:DNA聚合酶從引物3’端開始,將配對的脫氧核苷酸連接起來。
后續(xù)加工:DNA聚合酶I將引物切去,并合成空缺處的DNA單鏈,再由DNA連接酶將不連續(xù)的DNA子鏈連接起來(半不連續(xù)合成。先導(dǎo)鏈,滯后鏈)
子鏈合成特點:不能從頭合成;合成方向為“5’→3’合成”。
感悟生命的神秘:DNA聚合酶不但能夠催化磷酸二酯鍵的形成,還具有校對功能。它在每引入一個核苷酸后都要復(fù)查一次,只有堿基配對無誤后才能繼續(xù)往下聚合,它不能從頭合成。RNA聚合酶沒有校對功能,因此RNA的合成不需要引物,而是從頭合成的,它的錯配可能性較大,在RNA引物完成功能后即被DNA聚合酶I刪去,代之以高保真的DNA鏈。
[思考]DNA分子能準確復(fù)制的原因有哪些?
DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)提供模板;堿基互補配對;DNA聚合酶的復(fù)查功能。
[思考]細胞內(nèi)哪些物質(zhì)是從頭合成的?RNA合成、蛋白質(zhì)合成。
1.3DNA分子復(fù)制的人工控制
解開螺旋:在80~100℃時,DNA雙螺旋打開,形成兩條DNA單鏈,稱為變性。
恢復(fù)螺旋:在50℃左右時,兩條DNA單鏈重新形成雙螺旋結(jié)構(gòu),稱為復(fù)性。
復(fù)制條件:緩沖液,DNA模板,四種脫氧核苷酸,熱穩(wěn)定DNA聚合酶,兩種引物。
反應(yīng)場所:PCR儀(自動溫度周期性調(diào)節(jié))。
[思考]緩沖液相當細胞內(nèi)的什么成分?(核基質(zhì))1.4PCR的反應(yīng)過程
變性:在95℃時DNA解旋
復(fù)性:在50℃時引物與DNA單鏈結(jié)合
延伸:在72℃時合成DNA子鏈(兩個引物間的序列)2.實驗操作
2.1PCR反應(yīng)體系:緩沖液、DNA模板,四種脫氧核苷酸原料、熱穩(wěn)定DNA聚合酶、兩種RNA引物,水
2.2實驗操作步驟
2.3按照PCR反應(yīng)體系配方配制反應(yīng)液;
(2)將PCR反應(yīng)體系50μL用微量移液器轉(zhuǎn)移到微量離心管(0.5mL)中;
(3)將微量離心管放到PCR儀中;
(4)設(shè)置PCR儀的工作參數(shù)。
(5)DNA在PCR儀中大量擴增。
2.4水浴法:將微型離心管依次在95℃、55℃、72℃的恒溫水浴鍋中循環(huán)處理相應(yīng)時間。
3.實驗注意事項
3.1避免外源DNA污染:所用儀器、緩沖液、蒸餾水等使用前高壓滅菌。
3.2緩沖液和酶分裝成小份,-20℃低溫保存。
3.3每添加一種反應(yīng)成分,更換一個移液器的槍頭。
3.4混勻后離心處理,使反應(yīng)液集中在離心管底部。
4.結(jié)果分析與評價
4.1反應(yīng)液稀釋:取2LPCR反應(yīng)液,添加98L蒸餾水;2.分光光度計調(diào)零:將100L蒸餾水添加到比色杯中,在260nm處將分光光度計調(diào)整讀數(shù)為零。
4.2將100L反應(yīng)稀釋液倒入比色杯中,測定在260nm處的光吸收值。
4.3計算:DNA含量=50×光吸收值×稀釋倍數(shù)
(三)課堂總結(jié)、點評
(四)實例探究
例1在()的溫度范圍內(nèi),DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)解開
A.10-20℃B.80-100℃C.20-30℃D.40-60℃
解析:蛋白質(zhì)大多不能忍受60-80℃的高溫,而DNA在80℃以上才會變性。
答案:B
例2關(guān)于DNA的復(fù)制,下列敘述正確的是()
A.DNA聚合酶不能從頭開始合成DNA,只能從5’端延伸DNA鏈
B.DNA復(fù)制不需要引物
C.引物與DNA母鏈通過堿基互補配對進行結(jié)合
D.DNA的合成方向總是從子鏈的3’端向5’端延伸
解析:由于DNA聚合酶不能從頭開始合成DNA,只能從引物的3’端即復(fù)制方向由3’端向5’端延伸;由于DNA分子是反向平行的,子鏈是依據(jù)堿基互補配對原則,在DNA聚合酶作用下合成的,其合成方向是從子鏈5’端向3’端延伸。
答案:C
綜合應(yīng)用
例3下列有關(guān)PCR描述,不正確的是()
A.是一種酶促反應(yīng)
B.引物決定了擴增的特異性
C.擴增產(chǎn)量按y=(1+X)n
D.擴增對象是氨基酸序列
E.擴增對象是DNA序列
解析:PCR是一種體外迅速擴增DNA片段的技術(shù),它以極少量的DNA為模板,以四種脫氧核苷酸為原理,在引物的作用下使DNA聚合酶從引物的3’端連接脫氧核苷酸,短時間內(nèi)迅速復(fù)制上百萬份的DNA拷貝,其擴增產(chǎn)量為y=(1+X)n,y代表DNA片段擴增后的拷貝數(shù),x表示平均每次的擴增效率,n代表循環(huán)次數(shù),因此答案選D。
答案:D
課后探究
1、PCR與生物體DNA復(fù)制有何區(qū)別?
2、如果在案件偵破過程中,只收集到一根毛發(fā),但它所含的遺傳信息太少,該怎么辦呢?
★教后小記
教師在教學過程中,可以先引導(dǎo)學生回憶必修2的有關(guān)DNA復(fù)制的知識,在此基礎(chǔ)上,學生可加深對于PCR原理的認識。對于PCR反應(yīng)過程的教學,應(yīng)以讀圖識圖為主。教材中反應(yīng)過程圖解詳細的描繪了參與PCR的各種組成成分;每一輪反應(yīng)的三個基本步驟—變性、復(fù)性、延伸;每一步驟的作用。教師在教學中可以請學生在讀圖的同時,結(jié)合教科書中的文字說明來加深理解。當學生遇到難以理解的地方時,教師要及時給予解答。
第二節(jié)DNA分子的結(jié)構(gòu)和復(fù)制
學習目標:1.DNA分子結(jié)構(gòu)的探究歷程
2.DNA分子的主要結(jié)構(gòu)特點
3.DNA分子的復(fù)制過程及特點
4.米西爾森和斯塔爾證明DNA分子復(fù)制方式的實驗
[教材梳理]
一、DNA分子的結(jié)構(gòu)
1.DNA分子結(jié)構(gòu)的探索歷程
時期科學家成果
20世紀30年代后期瑞典科學家證明DNA是不對稱的
1951年查哥夫(美)定量分析DNA分子的堿基組成,發(fā)現(xiàn)腺嘌呤(A)的量總是等于胸腺嘧啶(T)的量,鳥嘌呤(G)的量總是等于胞嘧啶(C)的量
1952年富蘭克琳(英)確認DNA為螺旋結(jié)構(gòu),而不是由一條鏈構(gòu)成的
1953年沃森(美)和克里克(英)提出DNA分子的雙螺旋結(jié)構(gòu)模型
2.DNA分子的基本組成單位
DNA的基本組成單位是脫氧核苷酸,如圖所示:
(1)組成:①磷酸;②脫氧核糖;③含氮堿基。
(2)堿基:A:腺嘌呤;G:鳥嘌呤;C:胞嘧啶;T:胸腺嘧啶。
3.DNA分子的立體結(jié)構(gòu)
(1)整體:由兩條脫氧核苷酸鏈反向平行盤旋而成的雙螺旋結(jié)構(gòu)。
(2)外側(cè)——基本骨架:由脫氧核糖和磷酸交替連接構(gòu)成。
(3)內(nèi)側(cè)——堿基對:由兩條鏈上的堿基通過氫鍵連接成堿基對,是按堿基互補配對原則連接而成的,即A與T配對、G與C配對。
4.DNA分子的多樣性和特異性
(1)多樣性:堿基對排列順序的千變?nèi)f化。
(2)特異性:特定的堿基對排列順序構(gòu)成了每一個DNA分子的特異性。
二、DNA分子的復(fù)制
1.DNA復(fù)制的概念、時期、場所及條件
(1)概念:以親代DNA分子為模板合成子代DNA分子的過程。
(2)時期:細胞有絲分裂間期和減數(shù)分裂的間期。
(3)場所:細胞核(主要)。
(4)DNA復(fù)制的條件:
①模板:DNA分子的兩條鏈。
②原料:游離的四種脫氧核苷酸。
③能量:由細胞提供。
④酶:解旋酶和DNA聚合酶等。
2.過程
3.特點
①邊解旋邊復(fù)制;②半保留方式復(fù)制。
4.準確復(fù)制的原因和意義
(1)原因
①DNA分子獨特的雙螺旋結(jié)構(gòu)為復(fù)制提供了精確的模板;
②通過堿基互補配對,保證了復(fù)制能夠精確地進行。
(2)意義:使遺傳信息從親代傳給子代,從而確保了遺傳信息的連續(xù)性。
[牛刀小試]
一、DNA分子的結(jié)構(gòu)
1.觀察教材P68圖4-8,結(jié)合制作模型體驗,探討下列問題:
(1)DNA分子中同一條鏈和兩條鏈中連接相鄰兩個堿基的結(jié)構(gòu)有何不同?
提示:同一條鏈中連接相鄰兩個堿基的結(jié)構(gòu)是—脫氧核糖—磷酸—脫氧核糖—;兩條鏈中連接相鄰兩個堿基的結(jié)構(gòu)是氫鍵。
(2)運用堿基互補配對原則分析,在所有的雙鏈DNA分子中,(A+G)/(C+T)的值相同嗎?在DNA分子的一條鏈中是否存在同樣的規(guī)律?
提示:①相同。在雙鏈DNA分子中,由于A=T,G=C,所以嘌呤數(shù)等于嘧啶數(shù),即A+G=T+C,可得(A+G)/(T+C)=1,因此在所有的雙鏈DNA分子中(A+G)/(T+C)的值相同。
②在單鏈DNA分子中不存在同樣的規(guī)律,因為A與T,G與C不一定相等。
(3)某實驗小組同學制作了如下堿基對模型,你認為哪些是正確的,哪些是錯誤的?
提示:①~④所示模型中只有①正確,②、③、④均不正確。②中多了一個氫鍵,③中堿基配對錯誤,也未遵照“反向平行”的特點;④中未遵照“反向平行”特點。
2.連線
二、DNA分子的復(fù)制
閱讀教材P71~72,結(jié)合圖4-10、4-11,探究下列問題:
(1)DNA復(fù)制時有幾條模板鏈?新合成的DNA分子中的兩條鏈全是子鏈嗎?
提示:①兩條模板鏈(親代DNA分子解開螺旋的兩條鏈)。②不是,而是一條母鏈和一條子鏈。
(2)DNA復(fù)制時,用什么方法識別DNA中哪一條鏈是母鏈,哪一條鏈是子鏈?DNA復(fù)制所形成的子代DNA分子是否是親代DNA鏈和子代DNA鏈隨機結(jié)合的?
提示:①同位素標記法。②不是,而是親代DNA鏈與其相應(yīng)的子鏈結(jié)合形成的子代DNA分子。
(3)若將某一試管中加入緩沖液、ATP、DNA模板和四種脫氧核苷酸,并置于適宜的溫度下,能否完成DNA復(fù)制?分析原因。
提示:不能。復(fù)制條件不完全,缺少解旋酶、DNA聚合酶。
(4)若1個DNA分子含有m個腺嘌呤,則復(fù)制n次需要多少游離的腺嘌呤脫氧核苷酸?
提示:需(2n-1)m個。因為1個DNA分子復(fù)制n次,共形成2n個DNA分子,其中有兩條脫氧核苷酸鏈為母鏈,不需要游離的腺嘌呤脫氧核苷酸。
(5)DNA分子復(fù)制具有準確性,那么在任何情況下,DNA分子復(fù)制產(chǎn)生的子代DNA分子與親代DNA分子都完全相同嗎?
提示:不一定。DNA分子復(fù)制時,受到各種因素的干擾,堿基序列可能會發(fā)生改變,從而使后代DNA分子與親代DNA分子堿基序列不同,導(dǎo)致遺傳信息發(fā)生改變。
[重難突破]
一、DNA分子的結(jié)構(gòu)層次
1.DNA分子結(jié)構(gòu)中的“五、四、三、二、一”:
“五”——DNA分子的基本組成元素有5種(C、H、O、N、P)。
“四”——DNA分子的基本組成單位為“四種”脫氧核苷酸。
“三”——每種單位均由三分子物質(zhì)(1分子磷酸、1分子脫氧核糖及1分子含氮堿基)構(gòu)成。
“二”——兩條脫氧核苷酸長鏈。
“一”——一種規(guī)則的雙螺旋結(jié)構(gòu)。
2.DNA分子結(jié)構(gòu)層次圖示
二、DNA分子中的堿基計算規(guī)律
1.堿基互補配對原則
2.堿基間的數(shù)量關(guān)系
項目雙鏈DNA1鏈2鏈規(guī)律
A、T、G、C關(guān)系A(chǔ)=T,G=CA1=T2,G1=C2,
T1=A2,C1=G2雙鏈DNA中,A總等于T,G總等于C,且1鏈上的A等于2鏈上的T,1鏈上的G等于2鏈上的C
非互補堿基和之比,即A+GT+C或G+TA+C
1m1/mDNA雙鏈中非互補堿基之和總相等,兩鏈間非互補堿基和之比互為倒數(shù)
互補堿基和之比,即A+TG+C或G+CA+T
nnn在同一DNA中,雙鏈和單鏈中互補堿基和之比相等
某種堿基的比例(x為A、T、G、C中某種堿基的百分含量)12(x1+x2)
x1x2某堿基占雙鏈DNA堿基總數(shù)的百分數(shù)等于相應(yīng)堿基占相應(yīng)單鏈的比值的和的一半
3.堿基比例與DNA分子的共性和特異性
(1)共性:
①AT=TA=1;②GC=CG=1;③A+CT+G=A+GT+C=1
(2)特異性:
A+TG+C的比值是多樣的,是DNA分子多樣性和特異性的主要表現(xiàn)。
[特別提醒]
(1)在DNA單鏈中,A與T、G與C也可能相等。
(2)(A+T)/(G+C)的比值能體現(xiàn)DNA分子的特異性,不同的DNA分子中該值可能相同。
三、DNA分子復(fù)制過程中相關(guān)計算
1.DNA分子數(shù)、DNA鏈數(shù)及所占比例的計算
2.脫氧核苷酸鏈數(shù)的計算
(1)子代DNA分子中脫氧核苷酸總鏈數(shù)=2n+1條;
(2)親代脫氧核苷酸鏈數(shù)=2條;
(3)新合成的脫氧核苷酸鏈數(shù)=(2n+1-2)條。
3.所需脫氧核苷酸數(shù)的計算
若一親代DNA分子含有某種脫氧核苷酸m個,則:
(1)經(jīng)過n次復(fù)制,共需消耗游離的該脫氧核苷酸m(2n-1)個。
(2)第n次復(fù)制時,需消耗游離的該脫氧核苷酸m2n-1個。
4.與染色體、細胞數(shù)目相關(guān)的計算
研究DNA分子的半保留復(fù)制時,常涉及計算后代帶放射性標記的DNA、染色體或細胞所占比例的問題,此時要注意:
(1)一個DNA分子含兩條DNA鏈,只要有一條DNA鏈帶標記該DNA分子便帶標記。
(2)每條染色體含一個或兩個DNA分子,只要有一條DNA鏈帶標記,該染色體便帶標記。
(3)每個細胞含多條染色體,每條染色體的情況是一樣的,只需分析一條染色體(減數(shù)分裂時只需分析一對同源染色體)即可。
[實驗探究]
DNA復(fù)制方式的探究
1.方法
放射性同位素標記法和密度梯度離心技術(shù)。
2.原理
含15N的雙鏈DNA密度最大,含14N的雙鏈DNA密度最小,一條鏈含14N和一條鏈含15N的雙鏈DNA分子密度中等。
3.過程
(1)用放射性同位素15N標記大腸桿菌的DNA。
(2)將被標記的大腸桿菌轉(zhuǎn)入以含14N物質(zhì)為唯一氮源的培養(yǎng)液中培養(yǎng)。
(3)分別取完成一次細胞分裂和兩次細胞分裂的大腸桿菌,并將其中的DNA分子分離出來,進行密度梯度超速離心和分析。
4.結(jié)果圖示
5.結(jié)論:DNA的復(fù)制方式為半保留復(fù)制。
[考向聚焦]
[例1] 下列有關(guān)DNA分子結(jié)構(gòu)的敘述,正確的是()
A.DNA分子是由兩條反向平行的脫氧核苷酸長鏈盤旋而成的規(guī)則的雙螺旋結(jié)構(gòu),其基本骨架由脫氧核糖、磷酸和含氮堿基交替排列而成
B.整個DNA分子中,嘌呤數(shù)目等于嘧啶數(shù)目,所以每條DNA單鏈中A=T、G=C
C.與DNA分子中的堿基G直接相連的是脫氧核糖和堿基C
D.每個脫氧核糖均只與一個磷酸和一個堿基相連
[解析] DNA分子雙螺旋結(jié)構(gòu)的外側(cè)是磷酸與脫氧核糖交替排列構(gòu)成的基本骨架,堿基排列在內(nèi)側(cè)。若DNA分子的一條鏈上是堿基A,則另一條鏈上與之配對的一定是堿基T;一條鏈上是堿基G,則另一條鏈上與之配對的一定是堿基C,反之亦然。所以,在雙鏈DNA分子中A=T、G=C,但在單鏈中,堿基A的數(shù)目不一定等于堿基T的數(shù)目,堿基G的數(shù)目也不一定等于堿基C的數(shù)目。在一個脫氧核苷酸中,堿基G與脫氧核糖直接相連,兩鏈之間堿基G與堿基C互補配對。每個脫氧核糖均只與一個堿基相連,但除了游離的脫氧核糖只與一個磷酸相連外,其余脫氧核糖均與兩個磷酸相連。
[答案] C
[例2] (福建高考)雙脫氧核苷酸常用于DNA測序,其結(jié)構(gòu)與脫氧核苷酸相似,能參與DNA的合成,且遵循堿基互補配對原則。DNA合成時,在DNA聚合酶作用下,若連接上的是雙脫氧核苷酸,子鏈延伸終止;若連接上的是脫氧核苷酸,子鏈延伸繼續(xù)。在人工合成體系中,有適量的序列為GTACATACATG的單鏈模板、胸腺嘧啶雙脫氧核苷酸和4種脫氧核苷酸。則以該單鏈為模板合成出的不同長度的子鏈最多有()
A.2種B.3種
C.4種D.5種
[解析] 根據(jù)堿基互補配對原則,單鏈模板鏈中A與胸腺嘧啶配對。單鏈模板鏈中含有4個“A”,其中每個“A”均可能與胸腺嘧啶雙脫氧核苷酸配對,當單鏈模板上的“A”與胸腺嘧啶雙脫氧核苷酸配對會有4種不同長度的子鏈;若單鏈模板鏈上的“A”只與脫氧核苷酸結(jié)合,形成1種子鏈,所以最多會產(chǎn)生5種子鏈。
[答案] D
[例3] 科學家以大腸桿菌為實驗對象,運用同位素示蹤技術(shù)及密度梯度離心方法進行了DNA復(fù)制方式的探索實驗,實驗內(nèi)容及結(jié)果見下表。
組別1組2組3組4組
培養(yǎng)液中
唯一氮源14NH4Cl15NH4Cl14NH4Cl14NH4Cl
繁殖代數(shù)多代多代一代兩代
培養(yǎng)產(chǎn)物ABB的子Ⅰ代B的子Ⅱ代
操作提取DNA并離心
離心結(jié)果僅為輕帶
(14N/14N)僅為重帶
(15N/15N)僅為中帶
(15N/14N)1/2輕帶(14N/14N)
1/2中帶(15N/14N)
請分析并回答:
(1)要得到DNA中的N全部被放射性標記的大腸桿菌B,必須經(jīng)過________代培養(yǎng),且培養(yǎng)液中的________是唯一氮源。
(2)綜合分析本實驗的DNA離心結(jié)果,第________組結(jié)果對得到結(jié)論起到了關(guān)鍵作用,但需把它與第________組和第________組的結(jié)果進行比較,才能說明DNA分子的復(fù)制方式是________________。
(3)分析討論:
①若子Ⅰ代DNA的離心結(jié)果為“輕”和“重”兩條密度帶,則“重帶”DNA來自________,據(jù)此可判斷DNA分子的復(fù)制方式不是________復(fù)制。
②若將子Ⅰ代DNA雙鏈分開后再離心,其結(jié)果________(選填“能”或“不能”)判斷DNA的復(fù)制方式。
③若在同等條件下將子Ⅱ代繼續(xù)培養(yǎng),子n代DNA離心的結(jié)果是:密度帶的數(shù)量和位置________,放射性強度發(fā)生變化的是________帶。
④若某次實驗的結(jié)果中,子Ⅰ代DNA的“中帶”比以往實驗結(jié)果的“中帶”略寬,可能的原因是新合成DNA單鏈中的N尚有少部分為________。
[解析] 經(jīng)過一代培養(yǎng)后,只能是標記DNA分子的一條單鏈,所以要想對所有的DNA分子全部標記,要進行多代培養(yǎng);在探究DNA分子的復(fù)制方式為半保留復(fù)制的實驗中,“重帶”應(yīng)為兩個單鏈均被15N標記,“輕帶”為兩個單鏈均被14N標記,“中帶”為一個單鏈被14N標記,另一個單鏈被15N標記。
[答案] (1)多 15N(15NH4Cl) (2)3 1 2 半保留復(fù)制 (3)①B 半保留?、诓荒堋、蹧]有變化 輕 ④15N
———————————————[課堂歸納]————————————————
?[網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建]
填充:①雙螺旋②反向平行?、劢惶孢B接
④互補配對?、葸吔庑厪?fù)制?、薨氡A魪?fù)制
⑦解旋 ⑧合成子鏈
?[關(guān)鍵語句]
1.DNA分子由兩條脫氧核苷酸鏈構(gòu)成,兩鏈按反向平行方式盤旋成規(guī)則的雙螺旋結(jié)構(gòu),其脫氧核糖和磷酸交替連接,排列在外側(cè),堿基排在內(nèi)側(cè)。
2.DNA分子兩條鏈上的堿基通過氫鍵連接成堿基對,其中A一定與T配對,G一定與C配對,A與T之間形成2個氫鍵,G與C之間形成3個氫鍵。
3.組成DNA分子的堿基雖然只有4種,但堿基對的排列順序卻是千變?nèi)f化的,含n個堿基對的DNA分子,可形成4n種排列順序,這些排列順序即代表遺傳信息。
4.DNA分子堿基對排列順序的千變?nèi)f化,構(gòu)成了DNA分子的多樣性,而堿基對的特定的排列順序又構(gòu)成了每一個DNA分子的特異性。
5.DNA復(fù)制發(fā)生于細胞有絲分裂間期和減數(shù)分裂的間期。
6.DNA分子復(fù)制是半保留復(fù)制,DNA分子獨特的雙螺旋結(jié)構(gòu)為復(fù)制提供了精確的模板,通過堿基互補配對原則保證了復(fù)制能精確地進行。
7.DNA分子通過復(fù)制,使遺傳信息從親代傳給子代,從而確保了遺傳信息的連續(xù)性。
知識點一、DNA的結(jié)構(gòu)及相關(guān)計算
1.如圖為核苷酸鏈結(jié)構(gòu)圖,下列敘述不正確的是()
A.能構(gòu)成一個完整核苷酸的是圖中的a和b
B.圖中每個五碳糖都只有1個堿基與之直接相連
C.各核苷酸之間是通過化學鍵③連接起來的
D.若該鏈為脫氧核苷酸鏈,從堿基組成上看,缺少的堿基是T
解析:選A 核苷酸由1分子磷酸、1分子五碳糖和1分子堿基組成,即圖中的a,b中磷酸的連接位置不正確,A錯誤;由題圖可知,每個五碳糖都只有1個堿基與之直接相連,B正確;核苷酸之間通過磷酸二酯鍵即圖中③相連形成核苷酸鏈,C正確;脫氧核苷酸根據(jù)堿基不同分為腺嘌呤脫氧核苷酸、鳥嘌呤脫氧核苷酸、胞嘧啶脫氧核苷酸、胸腺嘧啶脫氧核苷酸,因此若該鏈為脫氧核苷酸鏈,從堿基組成上看,缺少的堿基是胸腺嘧啶T,D正確。
2.從某生物組織中提取DNA進行分析,其四種堿基數(shù)的比例是鳥嘌呤和胞嘧啶之和占全部堿基數(shù)的46%,又知該DNA的一條鏈(H鏈)所含的堿基中28%是腺嘌呤,則與H鏈相對應(yīng)的另一條鏈中腺嘌呤占該鏈全部堿基數(shù)的()
A.26%B.24%
C.14%D.11%
解析:選A 由題中條件可知C+G在整個DNA分子中占有的比例為46%,因為C+G在整個DNA分子中占有的比例等于它在DNA某一條鏈中占有的比例,則在H鏈上C+G=46%。又因為在H鏈上腺嘌呤占28%,則胸腺嘧啶(T)占的比例為26%,據(jù)堿基互補配對原則,H鏈上胸腺嘧啶等于其互補鏈中腺嘌呤的數(shù)目或比例,則另一條鏈中腺嘌呤占該鏈堿基數(shù)的26%。
知識點二、DNA的復(fù)制及相關(guān)計算
3.如圖為真核生物染色體上DNA分子復(fù)制過程示意圖,有關(guān)敘述錯誤的是()
A.圖中DNA分子復(fù)制是從多個起點同時開始的
B.圖中DNA分子復(fù)制是邊解旋邊雙向復(fù)制的
C.真核生物DNA分子復(fù)制過程需要解旋酶
D.真核生物的這種復(fù)制方式提高了復(fù)制速率
解析:選A 圖中DNA分子的復(fù)制是從多個起點開始的,但并不是同時開始的。圖中DNA分子的復(fù)制是邊解旋(需解旋酶)邊雙向復(fù)制的。
4.一個雙鏈均被32P標記的DNA由5000個堿基對組成,其中腺嘌呤占20%,將其置于只含31P的環(huán)境中復(fù)制3次。下列敘述不正確的是()
A.該DNA分子中含有氫鍵的數(shù)目為1.3×104個
B.復(fù)制過程需要2.4×104個游離的胞嘧啶脫氧核苷酸
C.子代DNA分子中含32P的單鏈與含31P的單鏈之比為1∶7
D.子代DNA分子中含32P與只含31P的分子數(shù)之比為1∶3
解析:選B 該DNA分子中A-T堿基對的數(shù)目為5000×2×20%=2000個,G-C堿基對的數(shù)目為5000-2000=3000個,則該DNA分子中含有的氫鍵數(shù)目為2000×2+3000×3=1.3×104個;該復(fù)制過程需要的胞嘧啶脫氧核苷酸數(shù)為(23-1)×3000=21000個;子代中含32P的單鏈與含31P的單鏈之比為2∶(23×2-2)=1∶7;子代中含32P與只含31P的DNA分子數(shù)之比為2∶(23-2)=1∶3。
5.據(jù)圖回答問題:
(1)該圖表示的生理過程是________,該過程主要發(fā)生在細胞的________(填部位名稱)。
(2)圖中的1、2、3、4、5分別表示____________________(填堿基名稱,用字母表示)。
(3)假如經(jīng)過科學家的測定,α鏈上的一段堿基序列(M)中的A∶T∶C∶G為2∶1∶1∶3,能不能說明科學家的測定是錯誤的?______,原因是______________________________。
(4)如果以(3)中的α鏈的M為模板,復(fù)制出的β鏈的堿基比例應(yīng)該是________________。
解析:DNA是雙螺旋結(jié)構(gòu),兩條脫氧核苷酸鏈之間的堿基遵循堿基互補配對原則,即A與T、C與G配對,所以DNA分子中A=T,G=C。DNA復(fù)制是半保留復(fù)制,即以DNA的兩條母鏈為模板,根據(jù)堿基互補配對原則進行堿基互補配對,所以形成的DNA子鏈必定與DNA中的一條母鏈完全相同,新形成的兩個DNA分子,與親代DNA分子完全相同。
答案:(1)DNA復(fù)制 細胞核 (2)A、T、C、C、T
(3)不能 在單鏈中不一定存在A=T、G=C
(4)T∶A∶G∶C=2∶1∶1∶3
(時間:25分鐘;滿分:50分)
一、選擇題(每小題2分,共20分)
1.下列關(guān)于沃森和克里克構(gòu)建DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)模型的敘述,錯誤的是()
A.沃森和克里克構(gòu)建DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)模型是建立在DNA分子以4種脫氧核苷酸(堿基為A、T、G、C)為單位連接而成的長鏈的基礎(chǔ)上
B.威爾金斯和富蘭克林通過對DNA衍射圖譜的有關(guān)數(shù)據(jù)進行分析,得出DNA分子呈螺旋結(jié)構(gòu)
C.沃森和克里克曾嘗試構(gòu)建了多種模型,但都不科學
D.沃森和克里克最后受腺嘌呤(A)的量總是等于胸腺嘧啶(T)的量,鳥嘌呤(G)的量總是等于胞嘧啶(C)的量的啟發(fā),構(gòu)建出了科學的模型
解析:選B 沃森和克里克最先提出了堿基在外側(cè)的雙螺旋和三螺旋結(jié)構(gòu)模型,后來又提出了堿基在內(nèi)側(cè)的雙螺旋結(jié)構(gòu)模型,并且同種堿基配對。最后提出了堿基互補配對的雙螺旋結(jié)構(gòu)模型。
2.下面關(guān)于DNA分子結(jié)構(gòu)的敘述中,錯誤的是()
A.每個雙鏈DNA分子含有四種脫氧核苷酸
B.每個堿基分子上均連接著一個磷酸和一個脫氧核糖
C.每個DNA分子中堿基數(shù)=磷酸數(shù)=脫氧核糖數(shù)
D.雙鏈DNA分子中的一段含有40個胞嘧啶,就一定會同時含有40個鳥嘌呤
解析:選B 脫氧核苷酸分子的連接方式應(yīng)為。在雙鏈的DNA分子內(nèi)部,堿基之間通過氫鍵連接形成堿基對,對一個堿基來說,一側(cè)連接著一個脫氧核糖,另一側(cè)通過氫鍵和另一個堿基相連。
3.在一個DNA分子中,腺嘌呤與胸腺嘧啶之和占全部堿基總數(shù)的42%,若其中一條鏈的胞嘧啶占該鏈堿基總數(shù)的24%,胸腺嘧啶占30%,則另一條鏈上,胞嘧啶和胸腺嘧啶分別占該鏈堿基總數(shù)的()
A.21%,12%B.30%,24%
C.34%,12%D.58%,30%
解析:選C 解這類題目,最好先畫出DNA分子的兩條鏈及堿基符號,并標出已知堿基的含量,這樣比較直觀,更易找到解題方法。然后利用DNA分子的堿基互補配對原則,由整個DNA分子中A+T=42%,可得出A1+T1即對應(yīng)單鏈堿基總數(shù)的百分比也為42%,則C1+G1=58%。由一條鏈中C1=24%,C1+G1=58%,得出對應(yīng)另一條單鏈中C2=34%,由一條鏈中A1+T1=42%,A1=12%,得出對應(yīng)另一條單鏈T2=12%。
4.(上海高考)在DNA分子模型搭建實驗中,如果用一種長度的塑料片代表A和G,用另一長度的塑料片代表C和T,那么由此搭建而成的DNA雙螺旋的整條模型()
A.粗細相同,因為嘌呤環(huán)必定與嘧啶環(huán)互補
B.粗細相同,因為嘌呤環(huán)與嘧啶環(huán)的空間尺寸相似
C.粗細不同,因為嘌呤環(huán)不一定與嘧啶環(huán)互補
D.粗細不同,因為嘌呤環(huán)與嘧啶環(huán)的空間尺寸不同
解析:選A A和G都是嘌呤堿基,C和T都是嘧啶堿基,在DNA分子中,總是A=T,G=C,依題意,用一種長度的塑料片代表A和G,用另一長度的塑料片代表C和T,則DNA的粗細相同。
5.如圖為DNA分子結(jié)構(gòu)示意圖,相關(guān)敘述正確的是()
a.②和③相間排列,構(gòu)成了DNA分子的基本骨架
b.④的名稱是胞嘧啶脫氧核苷酸
c.⑨是氫鍵,其形成遵循堿基互補配對原則
d.DNA分子中特定的脫氧核苷酸序列代表了遺傳信息
e.③占的比例越大,DNA分子越不穩(wěn)定
f.⑤⑥⑦⑧依次代表A、G、C、T
A.bcdf B.cdf
C.a(chǎn)bcfD.bce
解析:選B DNA分子是反向平行的雙螺旋結(jié)構(gòu),①磷酸與②脫氧核糖交替排列在外側(cè),構(gòu)成了DNA的基本骨架;④中的③②及②下方的磷酸基團組成胞嘧啶脫氧核苷酸;堿基互補配對,配對堿基之間通過氫鍵相連;DNA分子中特定的脫氧核苷酸序列代表了遺傳信息;G與C之間形成3條氫鍵,G與C含量越多,DNA分子越穩(wěn)定;根據(jù)堿基互補配對原則,⑤⑥⑦⑧依次代表A、G、C、T。
6.下列有關(guān)DNA復(fù)制的說法中,正確的是()
A.DNA復(fù)制時只有一條鏈可以作為模板
B.DNA復(fù)制所需要的原料是4種脫氧核苷酸
C.DNA復(fù)制的場所只有細胞核
D.DNA復(fù)制的時間只能是有絲分裂間期
解析:選B DNA復(fù)制時,兩條鏈都可以作為模板,真核生物DNA復(fù)制的場所可以是細胞核,也可以是線粒體和葉綠體,在細菌體內(nèi)還可以是擬核。DNA復(fù)制時需要的原料是4種脫氧核苷酸。
7.把培養(yǎng)在含輕氮(14N)環(huán)境中的一個細菌,轉(zhuǎn)移到含重氮(15N)環(huán)境中,培養(yǎng)相當于繁殖一代的時間,然后全部放回原環(huán)境中培養(yǎng)相當于連續(xù)繁殖兩代的時間后,細菌DNA組成分析表明()
A.3/4輕氮型、1/4中間型
B.1/4輕氮型、3/4中間型
C.1/2輕氮型、1/2中間型
D.3/4重氮型、1/4中間型
解析:選A 輕氮(14N)環(huán)境中的一個細菌轉(zhuǎn)移到重氮(15N)環(huán)境中培養(yǎng)相當于繁殖一代的時間后,DNA分子全為15N/14N,再返回輕氮(14N)環(huán)境中培養(yǎng)繁殖,產(chǎn)生8個DNA分子,3/4輕氮型、1/4中間型。
8.如圖表示DNA分子復(fù)制的片段,圖中a、b、c、d表示各條脫氧核苷酸鏈。一般地說,下列各項中正確的是()
A.a(chǎn)和c的堿基序列互補
B.b和c的堿基序列相同
C.a(chǎn)鏈中(A+T)/(G+C)的比值與b鏈中同項比值相同
D.a(chǎn)鏈中(A+T)/(G+C)的比值與d鏈中同項比值不同
解析:選C a、d兩條母鏈堿基互補,a、b兩條鏈堿基互補,c、d兩條鏈堿基互補,可推出a和c堿基序列相同,b和c堿基序列互補;兩條互補鏈中的(A+T)/(G+C)相同。
9.(山東高考)某研究小組測定了多個不同雙鏈DNA分子的堿基組成,根據(jù)測定結(jié)果繪制了DNA分子的一條單鏈與其互補鏈、一條單鏈與其所在DNA分子中堿基數(shù)目比值的關(guān)系圖,下列正確的是()
解析:選C DNA分子中(A+C)/(T+G)應(yīng)始終等于1;一條單鏈中(A+C)/(T+G)與其互補鏈中(A+C)/(T+G)互為倒數(shù),一條單鏈中(A+C)/(T+G)=0.5時,互補鏈中(A+C)/(T+G)=2;一條單鏈中(A+T)/(G+C)與其互補鏈中(A+T)/(G+C)及DNA分子中(A+T)/(G+C)都相等。
10.某DNA分子中含有1000個堿基對(被32P標記),其中有胸腺嘧啶400個。若將該DNA分子放在只含被31P標記的脫氧核苷酸的培養(yǎng)液中讓其復(fù)制兩次,其結(jié)果不可能是()
A.含32P的DNA分子占1/2
B.含31P的DNA分子占1/2
C.子代DNA分子相對分子質(zhì)量平均比原來減少1500
D.共消耗鳥嘌呤脫氧核苷酸1800個
解析:選B 該DNA分子在含31P的培養(yǎng)液中復(fù)制兩次,可得到4個DNA分子,其中含31P的DNA分子占100%,含32P的DNA分子占2/4=1/2。因為DNA復(fù)制為半保留復(fù)制,親代DNA分子的兩條鏈只可能進入兩個子代DNA分子中;4個DNA分子中有兩個DNA分子的每條鏈都只含有31P,還有兩個DNA分子都是一條鏈含31P,另一條鏈含32P。前兩個DNA分子相對分子質(zhì)量比原DNA分子共減少了4000,后兩個DNA分子比原DNA分子共減少了2000,這樣4個DNA分子的相對分子質(zhì)量平均比原來減少了6000/4=1500;在1000個堿基對的DNA分子中,胸腺嘧啶400個,則含有鳥嘌呤個數(shù)(1000×2-400×2)/2=600(個),復(fù)制兩次所消耗鳥嘌呤脫氧核苷酸數(shù)目為600×(22-1)=1800(個)。
二、非選擇題(共30分)
11.(10分)如圖是DNA片段的結(jié)構(gòu)圖,請據(jù)圖回答問題。
(1)圖甲是DNA片段的________結(jié)構(gòu),圖乙是DNA片段的________結(jié)構(gòu)。
(2)填出圖中部分結(jié)構(gòu)的名稱:[2]________________、[5]__________________。
(3)從圖中可以看出DNA分子中的兩條鏈是由________和________交替連接的。
(4)連接堿基對的化學鍵是____________,堿基配對的方式如下:即________與________配對;________與________配對。
(5)從圖甲可以看出組成DNA分子的兩條鏈的方向是________的,從圖乙可以看出組成DNA分子的兩條鏈相互纏繞成________的________結(jié)構(gòu)。
(6)含有200個堿基的某DNA片段中堿基間的氫鍵共有260個。請回答:
①該DNA片段中共有腺嘌呤________個,C和G共________對。
②該DNA片段復(fù)制4次,共需原料胞嘧啶脫氧核苷酸________個。
③在DNA分子穩(wěn)定性的比較中,________堿基對的比例高,DNA分子穩(wěn)定性高。
解析:(1)從圖中可以看出:甲表示的是DNA分子的平面結(jié)構(gòu)。而乙表示的是DNA分子的立體(空間)結(jié)構(gòu)。(2)圖中2表示的是一條脫氧核苷酸鏈片段,而5表示的是腺嘌呤脫氧核苷酸。(3)從圖甲的平面結(jié)構(gòu)可以看出:DNA分子中脫氧核糖和磷酸交替連接,排列在外側(cè)構(gòu)成了基本骨架。(4)DNA分子的兩條鏈上的堿基通過氫鍵連接成堿基對,且有一定規(guī)律:A與T配對,G與C配對。(5)根據(jù)圖甲可以判斷:組成DNA分子的兩條脫氧核苷酸鏈是反向平行的;從圖乙可以看出組成DNA分子的兩條脫氧核苷酸鏈相互纏繞成規(guī)則的雙螺旋結(jié)構(gòu)。(6)①堿基對G和C之間有三個氫鍵,而A和T間有兩個氫鍵,設(shè)該DNA片段堿基A有x個,堿基G有y個,則有以下關(guān)系:x+y=200×1/2=100,2x+3y=260,解得A為40個,G和C各為60個。②復(fù)制4次共需原料C為:(24-1)×60=900個。③C和G之間的氫鍵多于A、T之間的氫鍵,因此C和G比例越高,DNA分子穩(wěn)定性越大。
答案:(1)平面 立體(或空間) (2)一條脫氧核苷酸鏈片段 腺嘌呤脫氧核苷酸 (3)脫氧核糖 磷酸 (4)氫鍵 A(腺嘌呤) T(胸腺嘧啶) G(鳥嘌呤) C(胞嘧啶) (5)反向 規(guī)則 雙螺旋 (6)①40 60?、?00?、跜和G
12.(10分)DNA指紋技術(shù)正發(fā)揮著越來越重要的作用,目前在親子鑒定、偵察罪犯等方面是最為可靠的鑒定技術(shù)。
請思考回答下列有關(guān)DNA指紋技術(shù)的問題:
(1)DNA親子鑒定中,DNA探針必不可少,DNA探針實際是一種已知堿基順序的DNA片段。請問:DNA探針尋找基因所用的原理是:_______________________________。
(2)用DNA做親子鑒定時,小孩的條碼會一半與其生母相吻合,另一半與其生父相吻合,其原因是________________________________________________________。
(3)如圖為通過提取某小孩和其母親以及待測定的兩位男性的DNA,進行DNA指紋鑒定,部分結(jié)果如圖所示。則該小孩的真正生物學父親是_________________________。
(4)現(xiàn)在已知除了一卵雙生胞胎外,每個人的DNA是獨一無二的,就好像指紋一樣,這說明了:______________________________________________________________。
(5)為什么用DNA做親子鑒定,而不用RNA?________________________。
(6)為了確保實驗的準確性,需要克隆出較多的DNA樣品,若一個只含31P的DNA分子用32P標記的脫氧核苷酸為原料連續(xù)復(fù)制3次后,含32P的單鏈占全部單鏈的________。
解析:DNA具有特異性,不同個體的DNA分子不同,因此可利用DNA分子雜交原理進行親子鑒定。由于子代的同源染色體一條來自父方,一條來自母方,因此親子鑒定時,應(yīng)一半與父親吻合,一半與母親吻合。人體所有細胞都來源于同一個受精卵,因此都含有相同的遺傳物質(zhì)。
答案:(1)堿基互補配對原則 (2)孩子的每一對同源染色體一條來自父親,一條來自母親 (3)B (4)DNA分子具有多樣性和特異性 (5)因為基因在DNA上,而不在RNA上,且DAN具有特異性 (6)7/8
13.(10分)DNA復(fù)制方式可以通過設(shè)想來進行預(yù)測,可能的情況是:全保留復(fù)制、半保留復(fù)制、分散復(fù)制。
(1)根據(jù)圖示對三種復(fù)制作出可能的假設(shè):
①如果是全保留復(fù)制,則1個DNA分子形成2個DNA分子,其中一個是__________,而另一個是_______________________________________________________________;
②如果是半保留復(fù)制,則新形成的兩個DNA分子各有____________________;
③如果是分散復(fù)制,則新形成的DNA分子中__________________________________。
(2)請設(shè)計實驗來證明DNA的復(fù)制方式。
實驗步驟:
①在氮源為14N的培養(yǎng)基上生長的大腸桿菌,其DNA分子均為14N-DNA(對照)。
②在氮源為15N的培養(yǎng)基上生長的大腸桿菌,其DNA分子均為15N-DNA(親代)。
③將親代含15N的大腸桿菌轉(zhuǎn)移到14N培養(yǎng)基上,再連續(xù)繁殖兩代(Ⅰ和Ⅱ),用密度梯度離心方法分離。
(3)實驗預(yù)測:
①如果與對照(14N/14N)相比,子代Ⅰ能分離出兩條帶:________和________,則可以排除________,同時肯定是________________。
②如果子代Ⅰ只有一條________,則可以排除________,但不能肯定是_______。
③如果子代Ⅰ只有一條中密度帶,再繼續(xù)做子代ⅡDNA密度鑒定,若子代Ⅱ可以分出____________和____________,則可以排除__________________,同時肯定__________。
④如果子代Ⅱ不能分出________兩條密度帶,則排除________,同時肯定________。
(4)用圖例表示出最可能的實驗結(jié)果。
答案:(1)①親代的 新形成的?、谝粭l鏈來自親代DNA,另一條鏈是新形成的?、勖織l鏈中的一些片段是母鏈的,另一些片段是子鏈的 (3)①一條輕密度帶(14N/14N) 一條重密度帶(15N/15N) 半保留復(fù)制和分散復(fù)制 全保留復(fù)制 ②中密度帶(14N/15N) 全保留復(fù)制 半保留復(fù)制還是分散復(fù)制?、垡粭l中密度帶(14N/15N) 一條輕密度帶(14N/14N) 分散復(fù)制 半保留復(fù)制?、苤?、輕 半保留復(fù)制 分散復(fù)制 (4)最可能的實驗結(jié)果(如圖所示):
第二節(jié)遙感技術(shù)及其應(yīng)用學案
第二節(jié)遙感技術(shù)及其應(yīng)用學案
一、遙感技術(shù)
1、概念和原理
簡稱,是指借助對敏感的儀器,在不與探測目標接觸的情況下,記錄目標物對電磁波的、、等信息,揭示目標物的、及其變化的綜合探測技術(shù)。
2、特點:監(jiān)測范圍,可覆蓋整個地球,能、、,迅速獲取信息和實施動態(tài)監(jiān)測。
3、工作過程:信息——信息——信息——信息——遙感應(yīng)用
4、組成:RS由、、、以及相關(guān)技術(shù)等組成。
5、
類型運載工具優(yōu)點
航天遙感專題,航天飛機、、等覆蓋范圍,不受限制,
可、觀測等。
航空遙感強,可根據(jù)研究主題選擇適當?shù)?、和?br>
近地遙感——可用于、、監(jiān)測等中高分辨率的遙感任務(wù)中。
二、遙感與資源普查
1、資源、資源、資源等是遙感技術(shù)在資源普查中的重要應(yīng)用領(lǐng)域。
2、蘊藏礦產(chǎn)的地方有許多是或構(gòu)造帶,較容易借助遙感技術(shù)“發(fā)現(xiàn)”礦產(chǎn)的存在。
3、對森林、草原、綠地以及農(nóng)作物等資源的確調(diào)查中,通過遙感圖像或圖像處理技術(shù),提取植被的分布、、、、等數(shù)據(jù),為農(nóng)業(yè)、、
、等部門提供服務(wù)。
三、遙感與環(huán)境災(zāi)害監(jiān)測
1、21世紀,遙感技術(shù)不僅將為社會提供高分辨率的信息資源,改變?nèi)藗兊纳a(chǎn)、生活與交往方式,而且有助于人類重新審視“地球家園”,提高人們對周圍生活環(huán)境與
的認識。
2、是搞洪救災(zāi)與減災(zāi)決策的重要依據(jù),遙感技術(shù)所具有的和的特征,給水文預(yù)報,洪水分析等工作帶來很大的便利。
生物選修一5.2多聚酶鏈式反應(yīng)擴增DNA片段學案(人教版)
俗話說,凡事預(yù)則立,不預(yù)則廢。教師要準備好教案,這是教師需要精心準備的。教案可以讓學生們充分體會到學習的快樂,幫助教師有計劃有步驟有質(zhì)量的完成教學任務(wù)。你知道怎么寫具體的教案內(nèi)容嗎?以下是小編收集整理的“生物選修一5.2多聚酶鏈式反應(yīng)擴增DNA片段學案(人教版)”,歡迎大家閱讀,希望對大家有所幫助。
課題2 多聚酶鏈式反應(yīng)擴增DNA片段問題導(dǎo)學
一、PCR的原理
活動與探究1
1.細胞內(nèi)DNA復(fù)制需要的基本條件有哪些?該條件在DNA復(fù)制中起何作用?
2.什么是引物?它有什么特點?用于PCR的引物一般長度是多少?
3.討論:DNA合成的方向有什么特點?兩條子鏈的合成起始于DNA的同一端嗎?
4.PCR技術(shù)中,高溫能使DNA雙鏈解旋,但也會導(dǎo)致DNA聚合酶失活,如何解決?
遷移與應(yīng)用1
PCR過程中起催化作用的酶是()。
A.解旋酶 B.RNA聚合酶
C.TaqDNA聚合酶D.DNA連接酶
細胞內(nèi)DNA復(fù)制與PCR技術(shù)的比較
細胞內(nèi)DNA復(fù)制PCR
不
同
點解旋解旋酶催化,部分解旋解鏈95℃高溫解旋解鏈,雙鏈完全分開
酶解旋酶、DNA聚合酶、DNA連接酶TaqDNA聚合酶
能量ATP不加
溫度體內(nèi)溫和條件95℃→55℃→72℃
特點整個DNA復(fù)制,只在分裂間期復(fù)制一次目的基因片段,按需要無限擴增
相同點①需DNA模板;②需脫氧核苷酸作原料;③子鏈延伸方向都是從5′端到3′端;④都遵循堿基互補配對原則,半保留復(fù)制
注:解旋酶的作用是使DNA兩條鏈的氫鍵斷開,而DNA聚合酶都是催化形成磷酸二酯鍵的。
二、PCR的反應(yīng)過程
活動與探究2
1.PCR一般要經(jīng)歷30多次循環(huán),每次循環(huán)可以分為哪幾步?
2.PCR循環(huán)之前,常要進行一次預(yù)變性,預(yù)變性的目的是什么?
3.PCR循環(huán)過程中,變性溫度設(shè)置94℃,時間設(shè)置30s的原因是什么?
4.PCR緩沖液相當于細胞內(nèi)的什么成分?
5.當PCR反應(yīng)體系的溫度由變性后緩慢冷卻到50℃左右時,引物與模板可結(jié)合,而解開的兩個DNA模板鏈能夠重新結(jié)合嗎?為什么?
6.PCR過程中的DNA聚合酶能對最初的DNA模板進行完整的復(fù)制嗎?為什么?
7.決定PCR反應(yīng)特異性的原因有哪些?
遷移與應(yīng)用2
利用PCR技術(shù)擴增某DNA片段得到下圖所示產(chǎn)物,則該產(chǎn)物至少經(jīng)過幾次循環(huán)才能產(chǎn)生?()
A.1次B.2次
C.3次D.4次
1.PCR反應(yīng)過程圖解
(1)變性:當溫度上升到90℃以上時,雙鏈DNA解旋為單鏈,如下圖:
(2)復(fù)性:系統(tǒng)溫度下降至55℃時,兩種引物通過堿基互補配對與兩條單鏈DNA結(jié)合,如下圖:
(3)延伸:當系統(tǒng)溫度上升至72℃左右時,溶液中的四種脫氧核苷酸(A、T、G、C)在DNA聚合酶的作用下,據(jù)堿基互補配對原則合成新的DNA鏈,如下圖:
2.PCR過程的溫度條件和時間控制
變性復(fù)性延伸
預(yù)變性94℃,5min——
30次94℃,30s55℃,30s72℃,1min
最后一次94℃,1min55℃,30s72℃,1min
三、PCR實驗操作和結(jié)果分析評價
活動與探究3
1.討論PCR實驗過程中有哪些注意事項。
2.如何判斷DNA擴增成功?
遷移與應(yīng)用3
PCR實驗中使用的微量離心管、緩沖液以及蒸餾水使用前必須進行的關(guān)鍵步驟是()。
A.反復(fù)洗滌B.用酒精擦洗
C.高壓滅菌D.在-20℃下儲存
1.PCR體外擴增DNA片段的實驗流程
準備 按照PCR反應(yīng)體系的配方將所需試劑擺放于實驗桌上
移液 用微量移液器按照配方在微量離心管中依次加入各組分
混合 蓋嚴離心管口的蓋子,用手指輕輕彈擊管壁
離心 將微量離心管放在離心機上,離心約10s。目的是使反應(yīng)液集中在離心管底部
反應(yīng) 將離心管放入PCR儀中,設(shè)置程序進行反應(yīng):變性―→復(fù)性―→延伸
2.實驗中DNA含量的測定
DNA在260nm的紫外線波段有一強烈的吸收峰,峰值的大小與DNA的含量有關(guān)??梢岳肈NA這一特點進行DNA含量的測定,具體方法如下:
(1)稀釋:2μLPCR反應(yīng)液,加入98μL蒸餾水,即將樣品進行50倍稀釋
(2)對照調(diào)零:以蒸餾水作為空白對照,在波長260nm處,將紫外分光光度計的讀數(shù)調(diào)節(jié)至零
(3)測定:取DNA稀釋液100μL至比色杯中,測定260nm處的光吸收值
(4)計算:DNA含量(μg/mL)=50×(260nm的讀數(shù))×稀釋倍數(shù)
3.幾種PCR方法
有反轉(zhuǎn)錄PCR、擴增未知序列的PCR、致突變PCR、定量PCR、免疫PCR等方法,PCR還可與其他方法聯(lián)合使用,有很多新的聯(lián)合法。
(1)反轉(zhuǎn)錄PCR
反轉(zhuǎn)錄PCR就是把RNA提取后反轉(zhuǎn)錄成互補DNA,并以此互補DNA鏈為模板進行的PCR反應(yīng)。通常用于檢測某種RNA是否被表達,或者比較其相對表達水平。
(2)實時熒光定量PCR
所謂的實時熒光定量PCR就是通過對PCR擴增反應(yīng)中每一個循環(huán)產(chǎn)物的熒光信號的實時檢測,從而實現(xiàn)對起始模板定量及定性的分析。在實時熒光定量PCR反應(yīng)中,引入了一種熒光化學物質(zhì),隨著PCR的進行,PCR產(chǎn)物不斷累積,熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線。
(3)免疫PCR
免疫PCR是利用抗原抗體反應(yīng)的特異性和PCR擴增反應(yīng)的極高靈敏性而建立的一種微量抗原檢測技術(shù)。
答案:
課前預(yù)習導(dǎo)學
一、1.體外 DNA DNA拷貝
2.解旋 DNA母鏈 脫氧核苷酸 DNA聚合
預(yù)習交流1:提示:DNA聚合酶不能從頭合成DNA,只能從3′端延伸DNA鏈。因此,DNA復(fù)制需要引物,DNA的合成方向總是從子鏈的5′端向3′端延伸。
3.80~100℃ 雙螺旋 雙鏈 變性 降低 雙鏈
4.緩沖 DNA 兩條模板鏈 引物 脫氧核苷酸 TaqDNA聚合 溫度
二、1.變性 90℃ 解旋 95
2.復(fù)性 50℃ 兩種 堿基互補配對 55
3.延伸 72℃ TaqDNA聚合酶
預(yù)習交流2:(1)提示:DNA分子首先在解旋酶的作用下解旋,然后以解開的每一段母鏈為模板,在DNA聚合酶等酶的作用下合成與母鏈堿基互補的一段子鏈,隨著模板鏈解旋過程的進行,新合成的子鏈也不斷延伸,同時,每條新鏈與其對應(yīng)的模板鏈盤繞成雙螺旋結(jié)構(gòu)。
(2)提示:PCR在高溫條件下(90~100℃)解旋,而細胞內(nèi)的DNA在解旋酶的作用下解旋。
三、1.溫度 3 恒溫水浴鍋
2.塑料管 0.5mL
3.微量移液器
四、1.外源DNA 高壓滅菌
2.分裝成小份 -20℃
3.槍頭 更換
預(yù)習交流3:提示:是用塑料加工制作的。
課堂合作探究
活動與探究1:
1.提示:細胞內(nèi)DNA復(fù)制需要的基本條件和作用分別是:(1)解旋酶:打開DNA雙鏈。(2)DNA母鏈:提供DNA復(fù)制的模板。(3)4種脫氧核苷酸:合成子鏈的原料。(4)DNA聚合酶:催化合成DNA子鏈。(5)引物:使DNA聚合酶能夠從引物的3′端開始連接脫氧核苷酸。
2.提示:引物是一小段DNA或RNA,它能與DNA母鏈的一段堿基序列互補配對。用于PCR的引物長度通常為20~30個核苷酸。
3.提示:(1)DNA的羥基末端稱為3′端,磷酸基團的末端稱為5′端,且DNA的一條鏈為3′→5′,另一條互補鏈為5′→3′,即DNA的兩條鏈是反向的。(2)DNA合成的方向總是從子鏈的5′端向3′端延伸(即沿母鏈的3′→5′),所以兩條子鏈的合成分別起始于DNA的兩端。
4.提示:尋找和使用耐高溫的DNA聚合酶。
遷移與應(yīng)用1:C 解析:PCR技術(shù)解旋過程是利用了95℃高溫使DNA變性解旋;RNA聚合酶是轉(zhuǎn)錄過程所需的酶;DNA連接酶是基因工程和DNA體內(nèi)復(fù)制所需的酶;PCR技術(shù)延伸中所用的酶是TaqDNA聚合酶。
活動與探究2:
1.提示:每次循環(huán)可以分為變性、復(fù)性和延伸三步。
2.提示:預(yù)變性的目的是增加大分子模板DNA徹底變性的概率。
3.提示:變性溫度過低,解鏈不完全導(dǎo)致DNA不能擴增,變性溫度過高影響酶的活性;在此溫度條件下如果處理時間過長,將會導(dǎo)致酶的鈍化。
4.提示:由于緩沖液為DNA的復(fù)制提供場所,相當于細胞內(nèi)DNA復(fù)制的場所,所以緩沖液相當于核基質(zhì)。
5.提示:不能。(1)模板DNA鏈比引物長得多而且復(fù)雜得多,不易重新結(jié)合。(2)引物和模板之間的碰撞機會遠遠高于兩個DNA模板鏈之間的碰撞機會。(3)加入的引物的量較大,而模板數(shù)量少。
6.提示:不能。第一次循環(huán)時,只能從引用結(jié)合的部位開始。由引物Ⅰ延伸而成的DNA單鏈會與引物Ⅱ結(jié)合,進行DNA的延伸,由引物Ⅱ延伸而成的DNA單鏈會與引物Ⅰ結(jié)合,進行DNA的延伸之后,DNA聚合酶只能特異地復(fù)制處于兩個引物之間的DNA序列,使這段固定長度的序列呈指數(shù)擴增。
7.提示:(1)待擴增DNA片段的特異性。(2)引物與模板特異性地結(jié)合。(3)堿基互補配對原則。(4)耐高溫的TaqDNA聚合酶的催化作用具有專一性。
遷移與應(yīng)用2:B 解析:PCR技術(shù)中,第一次循環(huán)產(chǎn)生兩個DNA分子,每個DNA分子只有一條鏈具有引物。第二次循環(huán)產(chǎn)生四個DNA分子,其中兩個DNA分子只有一條鏈具有引物,另兩個DNA分子兩條鏈都具有引物。
活動與探究3:
1.提示:(1)避免外源DNA污染:所用儀器、緩沖液、蒸餾水等使用前必須進行高壓滅菌。
(2)緩沖液和酶分裝成小份,-20℃低溫保存。
(3)每添加一種反應(yīng)成分,更換一個移液器的槍頭。
(4)混勻后離心處理,使反應(yīng)液集中在離心管底部。
2.提示:(1)教材中的方法,可以通過計算DNA含量來評價擴增的效果。
(2)電泳檢測的方法,可以通過在紫外線下直接觀察DNA帶的分布及粗細程度來評價擴增的效果。
遷移與應(yīng)用3:C 解析:為了避免外源DNA等因素的污染,PCR實驗中使用的微量離心管、槍頭、緩沖液以及蒸餾水等在使用前必須進行高壓滅菌。PCR所用的緩沖液和酶應(yīng)分裝成小份,并在-20℃下儲存。使用前,將所需試劑從冰箱拿出,放在冰塊上緩慢融化。
當堂檢測
1.下列有關(guān)PCR的描述,不正確的是()。
A.是一種酶促反應(yīng)
B.引物決定擴增的特異性
C.擴增的對象是氨基酸序列
D.擴增的對象是DNA序列
答案:C 解析:PCR是特異擴增兩個引物間的脫氧核苷酸序列,而不是氨基酸序列。
2.引物長度通常為20~30個核苷酸的一段()。
A.DNAB.RNA
C.DNA或RNAD.雙鏈DNA
答案:C 解析:DNA復(fù)制過程均需要引物的參與,引物是一小段RNA或DNA。
3.PCR利用了DNA的什么原理,來控制DNA的解聚與結(jié)合?()
A.特異性B.穩(wěn)定性
C.熱變性D.多樣性
答案:C 解析:PCR利用了DNA的熱變性原理,通過控制溫度來控制雙鏈的解聚與結(jié)合。
4.PCR過程中的復(fù)性是指()。
A.在90℃以上時,兩條DNA單鏈通過堿基互補配對形成DNA雙螺旋
B.在50℃左右,兩條DNA單鏈通過堿基互補配對形成DNA雙螺旋
C.在90℃以上時,兩種引物通過堿基互補配對與兩條單鏈DNA結(jié)合
D.在50℃左右,兩種引物通過堿基互補配對與兩條單鏈DNA結(jié)合
答案:D 解析:PCR過程中的復(fù)性發(fā)生在50℃左右的低溫條件下,指引物與單鏈DNA的結(jié)合,不是兩條單鏈DNA的結(jié)合。
5.標準的PCR過程一般分為變性、復(fù)性、延伸三大步,這三大步需要的溫度依次是()。
A.94℃、55℃、72℃B.72℃、50℃、94℃
C.50℃、94℃、72℃D.80℃、50℃、72℃
答案:A 解析:當溫度上升到90℃以上時,作為模板的雙鏈DNA解旋成為單鏈DNA,稱之為變性;當溫度下降到50℃左右時,兩種引物通過堿基互補配對與兩條單鏈DNA結(jié)合,稱為復(fù)性;當溫度回升到72℃左右時(TaqDNA聚合酶的最適反應(yīng)溫度),在單鏈上4種脫氧核苷酸按照堿基互補配對原則連接在引物之后,使引物鏈延伸,形成互補的DNA雙鏈,稱為延伸。
用流程圖表示PCR的操作步驟。